誘發(fā)多倍體技術(shù) 秋水仙素是育種工作者用于染色體數(shù)目加倍的一種非常重要的化學物質(zhì)。其作用是抑制細胞有絲分裂中紡錘絲形成和阻滯染色體運動,從而使染色體分散,但不形成新的細胞壁,因此,使經(jīng)處理的細胞多出一組額外的染色體。
秋水仙素有巨毒,使用時必須小心。常用的劑量為0.05——0.2%,溶液較好新鮮配制。在配制時,應(yīng)先將其粉末溶解在幾滴工業(yè)酒精中,而后再補足需加的水。
處理單子葉植物的種子或籽苗時,可直接浸漬于秋水仙素溶液。但處理雙子葉的籽苗時,通常是將一滴秋水仙素溶液滴在生長點上,在子葉張開后,每天滴一次或兩次,連續(xù)滴幾天。如果植株表面有蠟質(zhì)或毛,可以先將植株浸濕,然后再滴。除此之外,已長大的植株或它的一部分,也可以處理,但必須是分生組織或愈傷組織。有時,處理莖上的腋芽、接穗和砧木切割的表面也會有效。若將百合的鱗莖浸泡在0.1%的秋水仙素溶液中八小時左右,其鱗莖表面生出的不定芽,也會從鱗片中吸收到溶液,并可產(chǎn)生高比率的染色體加倍。其它帶有鱗莖的植物,也可以用類似的方法誘發(fā)。但是,以秋水仙素處理水仙,卻遇到了困難。1976年North在處理前先將鱗莖切成小塊,并使每塊上帶有兩個鱗芽,在鱗片之間滴加溶液處理,結(jié)果十分容易地使鱗芽細胞的染色體得到了加倍。
在處理籽苗或植株的局部時,不會使整個籽苗或整條枝條的細胞染色體都得到加倍,因此,必須對材料進行檢測,其指標可以以葉子的大小和寬度的增加或以氣孔及葉片表皮細胞大小的差異性來表示。當檢測局部的指標時,可以用鑷子小心地撕下表皮,將處理過的和未處理的材料分別放在顯微鏡下進行同步鏡檢。凡得到染色體加倍的材料,其氣孔的大小普遍增加10——30%。具體操作方法是,用指甲油在葉片上涂一薄層,待干后,將其表皮剝下放在顯微鏡下測量。這種方法對許多材料都能迅速辦到,但是,對一些葉片上帶毛的植物則不易辦到。此外,以花粉粒的多少為指標進行測定也是可能的,因為多倍體的花粉一般都比二倍體多;但是需要等到開花后才能進行(詳細操作待另篇敘述)。
有時用莖的頻繁扦插和熱沖擊的辦法也可以誘導染色體加倍,但都不如用秋水仙素處理來得可靠。當用秋水仙素溶液處理得不到預(yù)期效果時,還可以考慮在加壓的條件下使用一氧化二氮。這一方法曾成功地獲得四倍體的郁金香,并用它來生產(chǎn)種子。此外,還成功地誘導出四倍體的Crepisphalaris。一氧化二氮的作用,也是阻止接合子在較好次核分
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