摘要：組培快繁技術(shù)研究結(jié)果表明：適宜鉆石玫瑰離體芽誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基為MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10～0.20mg/L；適宜叢生芽繼代增殖的培養(yǎng)基為MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L；適宜試管苗生根的培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.10mg/L，其生根率達(dá)90%。
關(guān)鍵詞：鉆石玫瑰；組培快繁；培養(yǎng)基；誘導(dǎo)分化
鉆石玫瑰（Rosasp.），薔薇科薔薇屬多年生花卉，為微型月季的一種，因其花枝短小,花朵如豆扣般大小,故美其名曰“鉆石玫瑰”或“袖珍玫瑰”。鉆石玫瑰除具有一般月季花容秀美、芳香馥郁、四季常開等特點(diǎn)外,還具有分枝多、株型矮小緊湊、耐寒、耐熱、適應(yīng)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),是現(xiàn)代城市綠化不可替代的材料，深受人們的喜愛[1]。目前鉆石玫瑰主要靠扦插繁殖,繁殖率低、速度慢,且后代出現(xiàn)品質(zhì)降低現(xiàn)象，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求。為此,我們開展了鉆石玫瑰組培快繁技術(shù)研究,擬用工廠化育苗措施解決常規(guī)生產(chǎn)所面臨的問題。
1材料與方法
1.1外植體的建立
供試材料采自重慶市園林綠化科學(xué)研究所品種圃從北京引進(jìn)已栽培馴化2年的鉆石玫瑰品種“紫色時(shí)代”當(dāng)年生植株。
剪取優(yōu)良健壯株當(dāng)年生枝條中段帶側(cè)芽的未木質(zhì)化或半木質(zhì)化莖段,用毛刷蘸肥皂水輕輕刷洗后流水沖洗1～2h,再剪成1.0～1.5cm左右?guī)б秆康那o段;超凈臺(tái)上，將莖段先用70%酒精溶液浸泡30s,無菌水沖洗2～3次，再置于0.1%升汞溶液中消毒9～12min,然后用無菌水沖洗3～4次,以備接種。
1.2離體芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)
將無菌莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)萌芽。誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的細(xì)胞分裂素6-BA和生長(zhǎng)素NAA，共組成5種培養(yǎng)基：MS+6-BA0.30mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L,MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.20mg/L,MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.10mg/L。每種培養(yǎng)基均接種20個(gè)離體芽,培養(yǎng)6周后統(tǒng)計(jì)芽誘導(dǎo)分化率（見表1）。
1.3叢生芽的繼代增殖培養(yǎng)
將誘導(dǎo)培養(yǎng)基上已萌發(fā)的嫩芽切下轉(zhuǎn)接到4種繼代培養(yǎng)基中繼代增殖。繼代培養(yǎng)基分別MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L，MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.20mg/L。每種培養(yǎng)基接種30個(gè)嫩芽,接種時(shí)單芽莖段長(zhǎng)0.5～1.0cm左右,培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)叢生芽的數(shù)量以及高于2cm的芽數(shù)（見表2）。
1.4試管苗的生根培養(yǎng)
選取繼代培養(yǎng)中生長(zhǎng)健壯的叢生芽,剪成1.2～1.5cm長(zhǎng)的單芽莖段，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基配方為：1/2MS+NAA0.10mg/L，1/2MS+IBA0.1mg/L，1/2MS+NAA0.20mg/L，1/2MS+IBA0.20mg/L，1/2MS+NAA0.50mg/L，1/2MS+IBA0.50mg/L。每種培養(yǎng)基接種30個(gè)莖段，接種15天后統(tǒng)計(jì)幼苗生根情況（見表3）。
以上MS培養(yǎng)基中的白砂糖濃度均為30.0g/L，1/2MS培養(yǎng)基中白砂糖濃度為20.0g/L，瓊脂均為3.5g/L,pH5.8，培養(yǎng)室溫度23（±2）℃,光照強(qiáng)度2000～2500Lx，光照時(shí)間10～12h/d。
2結(jié)果與分析
2.1離體芽的誘導(dǎo)結(jié)果
鉆石玫瑰離體芽的誘導(dǎo)較慢,接種4周后離體芽才開始萌動(dòng)，但芽萌動(dòng)后的生長(zhǎng)情況因培養(yǎng)基內(nèi)激素濃度的不同而不同。由表1可知，MS+6-BA0.30mg+NAA0.10mg/L培養(yǎng)基叢生芽少,由于6-BA濃度太低，芽分化相對(duì)較差，分化率為70%,但叢生芽在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)健壯；在MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L培養(yǎng)基上,叢生芽相對(duì)較少,芽分化率為105%,且叢生芽生長(zhǎng)細(xì)弱，說明該培養(yǎng)基中6-BA和NAA濃度配比不當(dāng)；在MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.10mg/L培養(yǎng)由于6-BA濃度過高,離體芽萌動(dòng)后僅產(chǎn)生愈傷組織,未分化出叢生芽；MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L和MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L兩種培養(yǎng)基上,20個(gè)離體芽分化出的叢生芽分別為49個(gè)和39個(gè)，分化率分別達(dá)245%和195%,且叢生芽生長(zhǎng)健壯。重復(fù)試驗(yàn)，篩選出適宜離體芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10～0.20mg/L。
2.2叢生芽的繼代增殖結(jié)果
從表2可以看出，鉆石玫瑰在所采用的4種繼代增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)3周后，芽的增殖倍數(shù)和大于2cm芽的比率存在差異。其中：MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L和MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L兩種培養(yǎng)基上，增殖的叢生芽多，且芽生長(zhǎng)健壯，芽的增殖倍數(shù)分別為5.67倍和5.2倍，大于2cm的芽占75.29%和71.79%，明顯高于其它培養(yǎng)基；在MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L培養(yǎng)基上，芽生長(zhǎng)細(xì)弱，叢生芽少，增殖倍數(shù)僅為2.1倍，大于2cm的芽占18.75%；MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.20mg/L培養(yǎng)基由于6-BA濃度過高，繼代芽產(chǎn)生愈傷組織后停止生長(zhǎng)分化。重復(fù)試驗(yàn)，篩選出適宜鉆石玫瑰繼代增殖的培養(yǎng)基為MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L。
2.3試管苗生根培養(yǎng)結(jié)果
從表3看出，鉆石玫瑰在所用的6種培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天后統(tǒng)計(jì)結(jié)果，試管苗的生根率為13.3%～90%，生根數(shù)為4～243根，平均根長(zhǎng)為0.26～1.5cm。在1/2MS+NAA0.20mg/L、1/2MS+NAA0.50mg/L、1/2MS+IB0.20mg/L、1/2MS+IBA0.50mg/L培養(yǎng)基上，試管苗10d開始生根,生根率分別為60%、23.3%、13.3%和30%，根數(shù)分別為90根、14根、4根和27根，平均根長(zhǎng)分別為0.35cm、0.26cm、0.6cm和0.45cm，且由于生長(zhǎng)素濃度過高，15d后根均變成深褐色，停止生長(zhǎng)后慢慢死亡。在1/2MS+IBA0.10mg/L和1/2MS+NAA0.10mg/L培養(yǎng)基上，培養(yǎng)9d開始生根,根系發(fā)達(dá),發(fā)育良好,生根率達(dá)63.3%和90%,平均根數(shù)8根和9根,平均根長(zhǎng)1.1cm和1.5cm，均明顯高于上述4種培養(yǎng)基，且小苗和根長(zhǎng)勢(shì)均良好。重復(fù)試驗(yàn)，在設(shè)計(jì)的6種培養(yǎng)基中,1/2MS+NAA0.10mg/L培養(yǎng)基上生根較好。
2.4生根試管苗的馴化移栽
將生根試管苗放在室外光線明亮的地方，閉瓶煉苗2～3d，再逐漸開瓶煉苗2～3d，讓植株經(jīng)受試管外環(huán)境的鍛煉后取出試管苗洗凈基部粘附的培養(yǎng)基，移植于珍珠巖：腐殖土：爐雜為1：3：3的基質(zhì)中，澆濃度為0.8g/kg多菌靈溶液，遮蔭保濕，空氣濕度保持在60%～70%，當(dāng)植株萌發(fā)新根后讓其逐漸見光，并降低濕度，直至暴露在外界條件下，移栽成活率可達(dá)75%～80%。
3小結(jié)與討論
3.1細(xì)胞分裂素6-BA和生長(zhǎng)素NAA作為外源激素加入培養(yǎng)基后,對(duì)鉆石玫瑰離體芽的誘導(dǎo)及分化影響十分顯著。適宜鉆石玫瑰離體芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為：MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10～0.20mg/L；較佳繼代增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L。
3.2鉆石玫瑰在試管內(nèi)生根需較低濃度的生長(zhǎng)素NAA和IBA，當(dāng)NAA或IBA大于2.0mg/L時(shí)，鉆石玫瑰雖能產(chǎn)生根,但根隨即變褐停止生長(zhǎng)后死亡。試驗(yàn)結(jié)果表明，誘導(dǎo)鉆石玫瑰試管苗生根的較佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.10mg/L，生根率可達(dá)90%。
3.3用組織培養(yǎng)方法可以提高鉆石玫瑰的繁殖速度，且植株根系發(fā)達(dá)，苗木生長(zhǎng)健壯、整齊,是批量繁殖鉆石玫瑰商品苗的一種好方法。
參考文獻(xiàn)
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芙蓉栽培技術(shù)