百合是重要的切花、盆花和庭院用植物材料。傳統(tǒng)的百合繁殖方法如分球、分珠芽或鱗片扦插、鱗片包埋等,存在繁殖系數(shù)較小,多代繁殖常造成退化以及種間雜交不親合等問題。采用組織培養(yǎng)進行百合的快速繁殖和脫毒復壯,可促進百合商品種球的生產(chǎn)和百合新品種的培育。
筆者以東方百合和亞洲百合為試材,采用鱗片作為外植體,研究不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑配比對兩種百合不定芽的誘導、芽的增殖和生根的影響,并摸索組培苗移栽的適宜條件,篩選出適合各階段的培養(yǎng)基及移栽基質(zhì)。
不同培養(yǎng)基對不定芽分化的影響
剝?nèi)o菌苗小鱗莖中間層小鱗片,切取鱗片基部約0.5~0.8cm2大小的方塊作為外植體,接種于添加不同濃度6-BA和NAA的MS基礎培養(yǎng)基上培養(yǎng),觀察不同濃度6-BA和NAA對鱗片不定芽分化的影響。培養(yǎng)10天后,外植體基部表面不同程度地出現(xiàn)了小突起,3~4周時部分小突起發(fā)育成不定芽,不定芽的發(fā)生情況見表1和表2。
由表1可以看出,東方百合鱗片在不添加任何植物生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上也有不定芽的發(fā)生,但是芽再生率較低且再生芽生長較弱。添加適量的6-BA與NAA有利于不定芽的誘導。6-BA濃度為0.1mg/L時,所有組合都獲得100%芽再生率,平均每個外植體獲得的不定芽數(shù)在NAA濃度為0.5mg/L時較多,為3.5個。6-BA濃度達到0.5mg/L時,不定芽呈叢狀生長,生長較弱。
對于亞洲百合,由表2可以看出,不同濃度6-BA和NAA配比,芽再生率及平均每個外植體再生的不定芽數(shù)不同。6-BA與NAA的比值大于或等于1.0時,芽再生率較高,在6-BA濃度為1.0mg/L、NAA濃度為1.0mg/L時達到較高,為100%。6-BA濃度低于1.0mg/L,NAA濃度低于6-BA濃度時,不定芽的再生情況較好,兩者的濃度都為0.5mg/L或1.0mg/L時獲得較多生長健壯的不定芽,分別為4.0和4.3;6-BA濃度達到1.5mg/L,不定芽生長較弱,并且出現(xiàn)不同程度的玻璃化現(xiàn)象。
與亞洲百合相比,東方百合小鱗片不定芽分化在添加較低濃度植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上即可獲得較好的結(jié)果,在本研究中,較適培養(yǎng)基為MS+0.1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA,而亞洲百合小鱗片不定芽分化的較適培養(yǎng)基為MS+1.0mg/L6-BA+1.0mg/LNAA。
不同濃度6-BA
對不定芽增殖的影響
將東方百合和亞洲百合鱗片外植體上產(chǎn)生的不定芽接種到添加不同濃度6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基上進行不定芽的增殖培養(yǎng)。結(jié)果表明,兩種百合的不定芽在不同濃度6-BA下都實現(xiàn)了增殖。東方百合在6-BA濃度較低時獲得較高的增殖倍數(shù),6-BA為0.1mg/L時增殖倍數(shù)較高,為3.9;亞洲百合不定芽增殖需要的6-BA濃度比東方百合的高,濃度為0.5mg/L時獲得的增殖倍數(shù)較高,為3.4(見表3)。
不定芽生根培養(yǎng)及移栽
不定芽在不同生根培養(yǎng)基上的生根情況表明,東方百合不定芽在MS基礎培養(yǎng)基上的生根情況優(yōu)于1/2MS基礎培養(yǎng)基,適當添加一定量的6-BA更有利于東方百合的生根,在添加0.1mg/L6-BA和0.2mg/LNAA的MS培養(yǎng)基上,東方百合不定芽的生根情況較好(見表4);亞洲百合不定芽在MS培養(yǎng)基及添加0~0.5mg/LNAA的1/2MS培養(yǎng)基上都能生根,其中以在添加0.2mg/LNAA的1/2MS培養(yǎng)基中生根數(shù)量較多,且植株生長健壯,利于移栽(見表5)。
當組培苗的根長長至1~2cm后即可進行馴化移栽。移栽前先開瓶煉苗,煉苗結(jié)束后洗凈根上的培養(yǎng)基,然后移栽至不同基質(zhì)中。移栽初期的小苗必須給予精心管理,保證充足的光照和空氣濕度,讓小苗慢慢適應外界環(huán)境,移栽后期對成活的小苗也要用心管理才能保證小苗的正常發(fā)育,忌大旱大澇。移栽45天后統(tǒng)計移栽成活率,以蛭石∶土為1∶1作為基質(zhì)時,移栽成活率在80%左右,而以蛭石∶珍珠巖為1∶1作為基質(zhì)時移栽成活率大于95%(見表6)。(楊春起 李邱)
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