組織培養(yǎng)已成為當前農(nóng)林種苗生產(chǎn)中的一種重要的繁殖手段,與常規(guī)的無性繁殖方法相比,它具有繁殖速度快、周年生產(chǎn)、產(chǎn)品一致性好等優(yōu)點,尤其在繁殖一些種源稀缺的品種時,更能體現(xiàn)它的優(yōu)勢。紅葉石楠是近年從國外引進的一個國際新品種,組織培養(yǎng)可以分以下幾個步驟進行:外植體的取得→初代培養(yǎng)(無菌系的建立)→繼代培養(yǎng)(增殖培養(yǎng))→生根培養(yǎng)→煉苗及過渡移栽→移植到大田。
外植體的取得
選擇紅葉石楠的莖尖和莖段作為組培用的外植體。在取得紅葉石楠母株后,先置于溫室內(nèi)培養(yǎng)2周左右,期間注意不灑葉面水,每隔3-5天噴施一次殺菌劑,可有效降低初代培養(yǎng)時的污染率。在實際操作中,選取嫩枝先端未木質(zhì)化和半木質(zhì)化部分,剪成長10cm左右的單芽,莖段部分去葉留2mm左右葉柄,莖尖部分可保留半張小葉,以飽和洗衣粉溶液浸泡3分鐘,用清水沖洗后備用。
初代培養(yǎng)
清洗后的外植體在接種前需進行消毒處理,在超凈工作臺上用75%酒精浸泡10秒鐘,再轉(zhuǎn)入0.15%升汞溶液中滅菌8分鐘,倒去滅菌液,用事先準備好的無菌水沖洗4-5次,瀝干水后,即可將帶腋芽的莖段或莖尖以生態(tài)學下端朝下,垂直接種到初代培養(yǎng)基上,以每瓶培養(yǎng)基接種一個外植體為宜。經(jīng)過多次試驗,初代培養(yǎng)基以1/2MS+蔗糖30g+瓊脂7g+2.0BA+0.2IBA為較佳,pH值5.5-5.8,培養(yǎng)室溫度控制在25℃-30℃之間,光照12小時。接種后一周左右腋芽開始萌動,30-40天可伸長到2cm左右,即可切下進入下一階段的繼代(增殖)培養(yǎng)。
繼代培養(yǎng)(增殖培養(yǎng))
一般較好次繼代時增殖率較低,經(jīng)2-3次繼代后增殖數(shù)可達5倍左右。繼代培養(yǎng)基可用MS+1.0BA+0.1IBA,pH值5.5-5.8之間,每日光照12小時。無根的試管苗經(jīng)30-40天培養(yǎng)達到3cm左右時,即可切割以擴大繁殖。當繼代苗達到一定數(shù)量后,可以進行生根培養(yǎng)。
生根培養(yǎng)
當紅葉石楠無根苗長到高2cm左右時,可轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基可用1/2MS+0.2-0.3NAA,一般經(jīng)一周左右可見紅色根生成,30-40天后根長1-3cm,即可進行煉苗反馴化,準備移栽。
煉苗及過渡移栽
紅葉石楠組培苗移栽可省略瓶內(nèi)煉苗過程,如能在溫室中擰松瓶蓋放置3-5天煉苗則更好,但要注意溫度應控制在20℃-30℃之間。過渡移栽是整個組培過程中較為關(guān)鍵的一步,如失敗,則前功盡棄。因此移栽前要準備充分,如能在早春和秋冬季移栽在溫床上效果較佳。在實際操作中,應根據(jù)不同地區(qū)的氣候特點而有所區(qū)別。在江浙一帶,過渡苗床可建在普通單體塑料大棚內(nèi),床寬1.2m左右,床四周用磚砌高30cm,床底整平,有條件的可加鋪地熱加溫線,上鋪15-25cm的移栽基質(zhì),基質(zhì)以蛭石∶珍珠巖∶泥炭=1∶1∶1為好。
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