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花葉香蒲的組織培養(yǎng)和植株再生

發(fā)布日期:2009-06-23

自然或人工濕地、濕地生態(tài)工程是近年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的一種污水處理技術(shù),其具有能耗低、高效、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn),應(yīng)用前景廣泛[1][2]。其關(guān)鍵在于找到合適的超富集植物。香蒲類(lèi)植物生活在淺水、濕地或沼澤地區(qū),分布范圍廣,生長(zhǎng)旺盛,在維持水生生態(tài)系統(tǒng)的良性循環(huán)中有著重要的作用,它能富集水體中的鉛、硒、鋅、銅等多種有害重金屬[3][4][5],對(duì)氮磷也有一定的吸收作用[5],能有效減輕水體的營(yíng)養(yǎng)化富集現(xiàn)象,對(duì)保持水生生態(tài)系統(tǒng)的平衡,改良水生生態(tài)環(huán)境有著重要的作用。
  花葉香蒲是一種集觀賞性與實(shí)用性于一身的香蒲新品種,它可廣泛應(yīng)用于各種人工或自然水體景觀中,既可提高水體景觀的觀賞價(jià)值,又能起到調(diào)節(jié)水體自身生態(tài)環(huán)境的作用。
  花葉香蒲的常規(guī)繁殖以分株繁殖方式為主,長(zhǎng)期大量的分株繁殖常常會(huì)導(dǎo)致種性的退化,從而影響植物的生活力和觀賞價(jià)值,但關(guān)于花葉香蒲的其他繁殖方法尚未見(jiàn)報(bào)道。植物的試管離體繁殖能在一定程度上復(fù)壯植物的種性,本文就花葉香蒲的離體繁殖作一個(gè)初步的探討,以期為花葉香蒲的大量應(yīng)用提供優(yōu)質(zhì)種苗保證。


1 材料與方法


  取花葉香蒲的莖尖和幼嫩心葉,經(jīng)千分之一升汞常規(guī)消毒后,無(wú)菌水沖洗干凈后,將莖尖逐層剝?nèi)ト~片至5mm左右大小,心葉取基部,切成1.0cm×1.0cm大小方塊,分別接種于各種待試培養(yǎng)基上,置于光環(huán)境和暗環(huán)境中培養(yǎng)。
  培養(yǎng)環(huán)境溫度為25℃,光培養(yǎng)光照時(shí)間10小時(shí),光照強(qiáng)度2500LX。


2 結(jié)果與討論


2.1 莖尖培養(yǎng)
  莖尖在光照培養(yǎng)條件下,6天后開(kāi)始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象,12天可見(jiàn)心葉開(kāi)始抽生,呈淡黃色,部分莖尖基部開(kāi)始腫大,18天開(kāi)始抽生第2片小葉,苗高達(dá)3.5cm,在MS+6-BA0.5+NAA0.1和MS+6-BA0.5+NAA0.1。MS+6-A0.5+NAA0.1培養(yǎng)基上部分莖尖基部有愈傷發(fā)生,呈黃色,較疏松,25天開(kāi)始抽生第三片小葉,愈傷長(zhǎng)大,無(wú)分化;暗培養(yǎng)條件下,8天后開(kāi)始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象,12天可見(jiàn)心葉萌動(dòng),15天個(gè)別基部有腫大現(xiàn)象,21天抽生第二片小葉,25天在MS+6-BA0.5+NAA0.1培養(yǎng)基上部分分化苗有根發(fā)生。
  從表1可以看到,在附加激素6-BA為0.5~1.5mg/L或KT為0.5~2.0mg/L和NAA為0.1~0.5mg/L范圍內(nèi),花葉香蒲的莖尖都能成活并正常生長(zhǎng)成苗。當(dāng)6-BA濃度達(dá)2.0mg/L,有玻璃化苗發(fā)生,而使用KT時(shí),未見(jiàn)玻璃化現(xiàn)象。
2.2 葉片培養(yǎng)
  從表2可以看到,花葉香蒲葉片培養(yǎng)的褐化情況較為嚴(yán)重,分化率低;使用KT作為附加細(xì)胞分裂素和在暗培養(yǎng)的條件下,可部分減輕褐化現(xiàn)象的發(fā)生。過(guò)高的激素水平雖可促使愈傷的發(fā)生,但不利于愈傷的生長(zhǎng),甚至?xí)䦟?dǎo)致愈傷的褐化死亡,而在低水平激素條件下,愈傷生長(zhǎng)緩慢。
  綜上所述,可見(jiàn)花葉香蒲的離體繁殖材料以莖尖為好,在添加適量外源生長(zhǎng)激素的情況下可一次成苗,在添加6-BA為0.5~1.5mg/L或KT0.5~2.0mg/L和NAA0.1~1.0mg/L的MS培養(yǎng)基上,離體培養(yǎng)均可獲得成功,光照條件能促進(jìn)莖尖的生長(zhǎng)發(fā)育,但會(huì)加重褐化現(xiàn)象的發(fā)生。

表1 不同培養(yǎng)條件下花葉香蒲莖尖培養(yǎng)的分化情況

培養(yǎng)條件

附加激素配比

材料數(shù)

污染數(shù)

褐化(死亡)數(shù)

分化數(shù)

分化率(%)

備注

光培養(yǎng)

6-BA2.0+NAA1.0

15

2

6

4

57.1

有玻璃化苗發(fā)生

6-BA1.5+NAA0.5

15

0

3

6

50.0

6-BA1.0+NAA0.2

15

2

4

8

72.3

6-BA0.5+NAA0.1

15

5

2

4

50.0

KT2.0+NAA1.0

15

2

0

9

55.6

KT1.5+NAA0.5

15

5

2

5

60.0

KT1.0+NAA0.2

15

3

1

6

62.5

KT0.5+NAA0.1

15

2

1

3

55.6

暗培養(yǎng)

6-BA2.0+NAA1.0

15

1

4

8

25.0

6-BA1.5+NAA0.5

15

1

3

6

80.0

6-BA1.0+NAA0.2

15

0

3

7

58.3

6-BA0.5+NAA0.1

15

4

0

6

55.6

有生根現(xiàn)象發(fā)生

 

表2 不同培養(yǎng)條件下花葉香蒲葉片培養(yǎng)的分化情況

 

培養(yǎng)條件

附加激素配比

材料數(shù)

污染數(shù)

褐化(死亡)數(shù)

分化數(shù)

分化率(%)

備注

光培養(yǎng)

6-BA1.0+NAA0.5

30

12

15

0

0

6-BA0.5+NAA0.5

30

9

13

1

12.5

6-BA0.1+NAA0.2

30

3

13

4

28.5

6-BA0.1+NAA0.1

30

7

15

3

37.5

分化愈傷生長(zhǎng)緩慢

KT1.0+NAA0.5

30

7

12

2

18.2

KT0.5+NAA0.5

30

3

8

6

31.6

KT0.1+NAA0.2

30

3

11

3

18.8

分化愈傷生長(zhǎng)緩慢

KT0.1+NAA0.1

30

5

5

1

5.0

分化愈傷生長(zhǎng)緩慢

暗培養(yǎng)

6-BA0.1+NAA0.5

30

6

14

3

33.3

培養(yǎng)后期愈傷部分死亡

6-BA0.5+NAA0.5

30

7

14

0

0

6-BA0.1+NAA0.2

30

8

11

0

0

6-BA0.1+NAA0.1

30

5

17

2

25.0

分化愈傷生長(zhǎng)緩慢

 

  此外,本文只對(duì)花葉香蒲離體培養(yǎng)作了一個(gè)初步的探討,關(guān)于愈傷的培養(yǎng)狀況、引起褐化的原因及解決方法等其它方面有待作進(jìn)一步研究。
作者:林 鴻1 劉錦蘭2 張雄勝1 潘宜平1

(1. 武漢園林科學(xué)研究所 430081 2. 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 430074)


參考文獻(xiàn)


[1] 陽(yáng)承勝,藍(lán)崇鈺,束文圣.重金屬在寬葉香蒲人工濕地系統(tǒng)中的分布與積累. 水處理技術(shù),2002,28(2):101~104.
[2] 陽(yáng)承勝.寬葉香蒲人工濕地生態(tài)恢復(fù)研究[D]. 中山大學(xué)碩士學(xué)位論文,1999:20~25.
[3] 周東美,郝秀珍,薛燕,等.污染土壤的修復(fù)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 生態(tài)環(huán)境,2004,13(2):234~242.
[4] 李永麗,李欣,李碩,等. 東方香蒲(Typha orientalis Presl)對(duì)鉛的富集特征及其EDTA效應(yīng)分析。生態(tài)環(huán)境,2005,14(4):555~558.
[5] 張,盧雪峰,李 翼.香蒲對(duì)硒元素的富集及對(duì)氮. 磷的吸收作用.科技通報(bào),2002,18(6):511~514.

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