日本岡田拓郎先生有關寒蘭的雜交與無菌播種的研究結果。

1、雜交組合類型與種子特性

寒蘭進行以下3種類型的雜交：

A型：青寒蘭品種之間：青寒蘭×福娘；

B型：紅花系品種之間：武陵（粉紅花系）×錦旗（紅花系）；

C型：自交組合：武陵×武陵。

（1）雜交與采種

芽花后3～4天雌蕊和雄蕊發(fā)育較充實，足進行雜交的較佳時期。雜交的方法足，先進行除雄，即將花柱頂部的花粉塊取出除去，再將父本的花粉塊放入柱頭的塌陷處。原則上1盆有5株以上的生長旺盛的母本植株，只結1個蒴果。

（2）雜交后的子房發(fā)育與栽培管理

雜交后10～15天，若發(fā)現(xiàn)子房開始發(fā)育、表面膨大，確認為授粉成功。4～6個月后子房達到較大。雜交后植株要消耗營養(yǎng)，要注意栽培管理。雜交后6個月內要多施肥，為保證生育正常，十分注意灌水、通風、保溫等措施。9月以后隨著天氣的涼爽，恢復到原來的栽培管理。雜交后到種子完熟（蒴果開裂）需10～12個月，也會受到母本植物的管理狀況的影響。

蘭花種子采收后，會發(fā)生一些生理、生態(tài)的變化，種子有后熟作用。對完熟寒蘭種子在貯藏中胚的變化的調查后表明，采種時的胚的長度是胚軸的1.3倍，1年后為1.8倍，2年后為2.0倍，3年后約為2.5倍，說明種子在貯藏時胚在不斷伸長（在冰箱內5～7℃貯藏）。

2、無菌播種

（1）播種的方法

將適量種子放入含有0.1N的KOH溶液的試管中，用手指按住試管口，充分搖動，約5分鐘分離的種子分散在處理液中。較適的處理時間，依雜交組合種類的不同有差別，約5～15分鐘。

接著用水充分洗去處理液，再用漂白粉上清液（5%溶液、3分鐘）進行滅菌，種子再一次用水洗凈后播種于播種培養(yǎng)基中。

播種用的容器為300ml的三角燒瓶，塞子是有孔的、用脫脂棉塞好的橡皮塞。由于東洋蘭種子的發(fā)芽對空氣的要求不是必要的，所以播種后在橡皮塞上部用加熱溶解的石蠟滴下密封。

播種后將培養(yǎng)容器置于恒溫箱內進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度為23±5℃、光照5000Lx、光照時間14小時。

（2）播種后胚的伸長及發(fā)芽

寒蘭種子播種后8個月左右才發(fā)現(xiàn)有發(fā)芽跡象。這時，種子表皮破裂，該時期被稱為發(fā)芽期。發(fā)芽一直持續(xù)到播種后10～12個月，播種后9個月以后發(fā)芽種子的胚及發(fā)芽形成的原球體出現(xiàn)褐變，防止褐變的方法還有待于研究。

（3）根狀莖的伸長

寒蘭的根狀莖轉接到新的培養(yǎng)基，根狀莖不斷地增殖，從根狀莖分化出無數(shù)側枝，生姜狀根向下伸長。在培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，經(jīng)數(shù)年根狀莖仍能繼續(xù)伸長，但基本上不分化芽。發(fā)現(xiàn)有分化的芽后，轉接到新的培養(yǎng)基上，幼芽很少褐變，經(jīng)1次繼代培養(yǎng)的根狀莖形成的總根狀莖數(shù)與不轉接相比，增加了13倍。因此，根狀莖發(fā)芽后，應盡早轉接到新的培養(yǎng)基中。

與春蘭相同，希望寒蘭根狀莖轉接到萌芽用培養(yǎng)基中分化出苗，但在萌芽用的基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)沒有萌芽。在基本培養(yǎng)基中添加BA2.5mg/L能分化出芽。在添加趾的培養(yǎng)基中，接種約20天后，根狀莖的先端開始形成葉原基，60天后形成幼葉，并且肉眼可見。之后，不但在根狀莖的先端，而且在根狀莖側面也開始分化出芽，1個根狀莖可分化出7～10個腋芽，并形成葉。與根狀莖先端形成芽不同，根狀莖側面形成的芽依不同雜交組合類型有所差異。試管苗的苗高達到10～15厘米時，可取出試管苗移栽到盆缽中培育，經(jīng)5～7年的栽培管理植株可開花。