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夜香樹的組織培養(yǎng)技術(shù)

發(fā)布日期:2010-09-15

  夜香樹又名洋素馨、夜來香、夜丁香,屬于茄科夜香樹屬。常綠灌木.高l一3m。枝條細(xì)長而稍彎垂。葉互生,長圓狀披針形或狹長圓形,長6~16cm,紙質(zhì),全緣,頂端漸尖.基部近圓形�;〝�(shù)多.排成疏散分枝的聚傘花序腋生或頂生;花冠高腳碟狀,長約2cm.綠色或黃綠色,檐部5淺裂,夜間極香,故名夜香樹。漿果橢圓形,直徑5~7mm。熟時(shí)白色;具種子l~6粒(多數(shù)為2~3粒),長卵形或一側(cè)壓扁,直徑1~2mm,黑褐色。干粒重6.45g。夜香樹原產(chǎn)南美洲。我國福建和云南有栽培。性喜溫暖氣候。畏寒,喜光.在半陰處亦能適應(yīng);較粗生,在沙土上也能生長,但以疏松濕潤的沙土壤或壤土生長良好。萌芽力強(qiáng)�;ㄆ�7一11月.入夜散發(fā)濃郁香氣;果期冬春季,種子2—3月成熟。夜來香樹條細(xì)長,夏秋開花.黃綠色花朵傍晚開放.飄出陣陣撲鼻濃香.在南方多用來布置庭院、窗前、塘邊和亭畔。鑒于目前夜香樹的扦插繁殖耗費(fèi)大量的原始材料和時(shí)間.不適于大規(guī)�;a(chǎn)。組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展為植物的生長繁殖開辟了一條新的途徑。培養(yǎng)路線:培養(yǎng)壯苗生根;放風(fēng)鍛煉幼苗;出瓶移栽。直接采用小拱棚大田一步移栽的方式.可獲得性狀優(yōu)良的大量種苗。

  l材料和方法

夜香樹的組織培養(yǎng)技術(shù)

  1.1材料

  原始材料為植物光照實(shí)驗(yàn)室盆栽夜香樹.選取生長發(fā)育良好的母株休眠芽枝段.剪成5~6cm莖段作為組織培養(yǎng)研究的外植體。

  1.2實(shí)驗(yàn)方法

  基本培養(yǎng)基:實(shí)驗(yàn)采用MS培養(yǎng)基.其中附加不同細(xì)胞分裂素(6一BA)和生長素(NAA、IBA)。所有培養(yǎng)基中激素單位為mg/L,pH值5.8—6.0,瓊脂0.6%。

  外植體處理:將外植體用自來水沖洗30min.然后在超凈工作臺上剪成1.5~2.0cm的帶芽莖段.采用2次滅菌法.即先用70%的酒精滅菌34s.再用0.1%升汞溶液消毒8min.然后用無菌水沖洗5次,接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

  培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為22+20C。以日光燈為主光源。光照時(shí)間14h/d。光照強(qiáng)度為2500—3000lx。

  較佳誘導(dǎo)和生根培養(yǎng)基的篩選:通過添加不同的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)(6一BA、NAA和IBA).叢生芽誘導(dǎo)處理見表l,芽分化誘導(dǎo)處理見表2。生根培養(yǎng):從繼代培養(yǎng)材料中選取3.0~5.Ocm的有效芽苗.切成1.0~1.5cm的莖段。轉(zhuǎn)入l/2MS+1.5%蔗糖+0.6%瓊脂為基本培養(yǎng)基.在附加不同濃度IBA情況下進(jìn)行生根實(shí)驗(yàn)(表3)。一定要去除基部的葉子,因?yàn)榛康娜~子一經(jīng)接觸培養(yǎng)基就會逐漸變硬、拱起和蜷縮,且極易發(fā)根。從而影響正常生根和生長。比較其各階段芽萌發(fā)、增殖系數(shù)、生根率等數(shù)據(jù)。篩選出較佳組合。

  2結(jié)果與分析

  2.1叢生芽誘導(dǎo)

  這一階段主要是誘導(dǎo)芽,在外植體初代培養(yǎng)8-10d.部分外植體芽開始膨大。14d后相繼出現(xiàn)新芽;培養(yǎng)24d后新芽可長至2.0~3.8cm,生長情況見表l。

  從表l可以看出。Ⅱ、Ⅳ這三個處理均有較高的出芽率.其中以處理Ⅱ即MS+6一BA0.5+NAA0.1芽萌發(fā)情況較好.芽粗壯.葉大且舒展.平均伸長3.5cm;處理I不添加生長調(diào)節(jié)物質(zhì),長勢較整齊,但芽的萌發(fā)較慢,新芽葉片小且蜷縮.平均伸長1.5cm;處理Ⅲ芽萌發(fā)情況不好,玻璃化情況嚴(yán)重。處理Ⅳ芽萌發(fā)情況亦可,平均伸長2.7cm,但葉片小,不舒展,長勢較弱。因此,Ⅳ雖有較高的出芽率,但新芽長勢不好。不適宜作為繼代材料使用。處理Ⅱ既有較高的出芽率且新芽長勢又好,是較適宜的初代培養(yǎng)基。

  2.2芽分化誘導(dǎo)培養(yǎng)

  芽分化增殖過程是夜香樹離體快速繁殖培養(yǎng)過程中一個非常重要的環(huán)節(jié)。獲得無菌材料后,是否能順利進(jìn)入快速增殖培養(yǎng)階段。篩選出符合要求分化增殖培養(yǎng)基是此階段的主要任務(wù).對于離體快速繁殖較終是否能應(yīng)用于生產(chǎn)時(shí)間.受兩個關(guān)鍵因素制約:(l)芽的增殖率、芽的增殖速度是離體快速繁殖中的重要環(huán)節(jié),直接關(guān)系到能否商業(yè)化生產(chǎn);(2)有效芽所占比例,指可作為繼代材料或生根材料的芽占全部芽的百分率。此時(shí)芽的質(zhì)量決定了芽的利用率的高低,所以選擇一個增殖率高且有效芽多的增殖培養(yǎng)基是離體快速繁殖的關(guān)鍵。

  將較好階段培養(yǎng)成功的芽切下,接種于分化增殖培養(yǎng)基上,培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基,6一BA、IBA分別設(shè)了5個梯度,共50個處理,培養(yǎng)25d。對生長情況(表2)分析可知,芽增殖用6-BAO.5mg/L、IBAO.2mg/L時(shí),芽增殖倍數(shù)為7.5,芽苗生長正常,節(jié)間略長,但有利于繼代繁殖。所以確定選取增殖倍數(shù)在5一6的分化增殖培養(yǎng)基,既符合增殖效果又符合得到健壯有效苗雙重標(biāo)準(zhǔn)的處理為6-BA0.4~0.5mg/L,IBAO.2一0.3mg/L。

  2.3生根培養(yǎng)

夜香樹的組織培養(yǎng)技術(shù)

  由表3分析可知,經(jīng)過30d的生根培養(yǎng),不同濃度IBA對夜香樹生根率、生根數(shù)均有不同程度的影響,其中以IBAO.3mg/L時(shí)生根情況較好,生根率高,發(fā)根早。有4一5條側(cè)生根。當(dāng)IBAO.5mg/L時(shí)發(fā)現(xiàn),有些根生長在植株基部愈傷組織上,根粗壯,側(cè)根多,但從苗瓶中取出移栽時(shí)根容易脫落,成活率不高。實(shí)驗(yàn)還表明,夜香樹生根快慢與生根質(zhì)量不僅受培養(yǎng)基的影響,而且與生根材料的健壯程度與木質(zhì)化程度有密切關(guān)系。粗壯、半木質(zhì)化材料生根快,主根與側(cè)生根發(fā)育好(表3)。

  2.4煉苗與移栽

  夜香樹試管苗在組培室內(nèi)濕度比較恒定、無菌條件下產(chǎn)生出來的,因此,沒有經(jīng)過抗冷、抗熱、抗早或抗病等因素的煉苗,當(dāng)移栽、種植到小棚或溫室栽培后往往會受到各種不利因素的影響,所以,在種植后7d應(yīng)及時(shí)噴灑殺菌劑,每隔7一10d噴1次。常用殺菌劑有多菌靈、瑞毒素、波爾多液,濃度掌握在l000~1500倍為宜。

  生根培養(yǎng)28d后,當(dāng)瓶內(nèi)組培苗長到scm左右時(shí),將生根的瓶苗移人自然光下光培養(yǎng)7d后揭膜。為減少取苗時(shí)對根系的傷害,在拔苗前適當(dāng)往瓶中加人一些自來水浸泡l一2h,將苗拔出后用自來水沖去附著的根部的瓊脂,移栽到用蒸汽消毒過的細(xì)煤渣或細(xì)沙中,成活率可達(dá)92腸以上。在煉苗床上培養(yǎng)15~20d移人大田或容器中。

  3苗期管理

  移植后每天淋水兩次,淋水時(shí)注意不要用膠管或噴槍直射、直淋,較好用噴霧方式淋水。因?yàn)樵嚬苊缬仔�,直射、直淋都會造成植株歪斜。生長初期7d噴施氮肥兩次,21d后加少許磷、鉀肥,棍合施用�;ê髮⒖葜瓦^密枝條剪除.對徒長進(jìn)行截短處理。常見病害有輪紋病,可用50%甲基托布津可濕性粉劑500倍液噴灑。蟲害有介殼蟲和粉虱,用50%殺螟松乳油1000倍液噴殺。

  4結(jié)論

  Ms+6-BAo.5mg/L+NAA0.lmg/L+蔗糖3.0%+瓊脂0.6%是夜香樹較為理想的誘導(dǎo)芽萌發(fā)的培養(yǎng)基;芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L,IBA0.2mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.6%,繼代培養(yǎng)25d增殖系數(shù)可達(dá)7.5,且生長健壯。

  在1/2MS+IBAO.3mg/L十蔗糖0.15%十瓊脂0.6%的培養(yǎng)基上,夜香樹生根效果較好,生根率達(dá)到100%,平均根數(shù)為5.7。在夜香樹移栽煉苗的過程中要嚴(yán)格控制空氣相對濕度,實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)夜香樹瓶苗極易失水皺縮,煉苗前10d空氣相對濕度都應(yīng)該保持在80%以上,較好是通過扣玻璃瓶或塑料薄膜來保持濕度。

  夜香樹的花香過于濃郁,近距離聞其香氣易使人引起頭暈或不舒服的感覺。故只可在公園或庭院的空曠處種植,且數(shù)量不宜過多過密。

  5討論

  在試管苗生根培養(yǎng)中,耗費(fèi)了大量的時(shí)間和培養(yǎng)空間,而采用試管苗瓶外生根不僅可以減少一次無菌操作的步驟,提高了培養(yǎng)空間,又簡化了組織培養(yǎng)程序,降低了生產(chǎn)成本,提高了繁殖系數(shù),能進(jìn)一步解決工廠化育苗的難題。因此是一項(xiàng)值得研究的技術(shù)之一。

  (木荷栽培管理:hm160.cn)

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