1 材料與方法

1.1 材料微型月季“紅寶石”的當(dāng)年生健壯無(wú)病蟲害嫩枝，帶腋芽。

1.2 方法

1.2.1 外植體處理將嫩枝剪成小段，每段帶一個(gè)腋芽，洗衣粉水震蕩清洗后，用流水沖洗。常規(guī)滅菌：0.1%升汞、20 min；2%次氯酸鈉、15min，后用無(wú)菌水清洗4次，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中（MS + 6-BA 1 mg/L +NAA 0.1 mg/L (以下單位同)）。

1.2.2 增殖培養(yǎng)將成活外植體萌發(fā)后，長(zhǎng)至2 cm 左右高的腋芽切下，轉(zhuǎn)至增殖培養(yǎng)基中。根據(jù)瞿素萍等對(duì)切花月季的實(shí)驗(yàn)[3]，MS 培養(yǎng)基誘導(dǎo)不定芽效果好，故本研究擬先采用MS 為基本培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)6-BA 與NAA 濃度篩選微型月季“紅寶石”的較佳增殖培養(yǎng)基，不同培養(yǎng)基激素配比見表1。1.2.3 生根培養(yǎng)當(dāng)增殖苗長(zhǎng)至2~3 cm高時(shí)，分棵切開轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中。主要對(duì)基本培養(yǎng)基類型，激素種類和濃度進(jìn)行篩選調(diào)節(jié)。不同培養(yǎng)基激素配比見表2。

1.2.4 培養(yǎng)條件MS，1/2MS 為基本培養(yǎng)基，瓊脂5.5 g/L，蔗糖30 g、pH 值為5.8，溫度（22±2）℃，光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx，光照時(shí)間12 h/d。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng)按

1.2.1 中方法進(jìn)行外植體滅菌后，將材料接種在初代培養(yǎng)基上（污染率和萌發(fā)率統(tǒng)計(jì)于表3），3 d 后觀察到污染現(xiàn)象，主要為細(xì)菌污染，污染率為35%。初代培養(yǎng)約10 d 后，腋芽開始萌動(dòng)，萌發(fā)率為58 %，同時(shí)腋芽逐漸展開，葉片增多，3 周后即可進(jìn)行增殖培養(yǎng)。

2.2 不同類型培養(yǎng)基對(duì)微型月季增殖的影響將腋芽萌發(fā)，且生長(zhǎng)健壯的芽苗分棵切開接種到所列的培養(yǎng)基中，25 d 后統(tǒng)計(jì)增殖率并觀察增殖生長(zhǎng)情況是，細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配合使用對(duì)組培苗增殖率總體上看效果是比較好的。所設(shè)計(jì)的8 種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)出側(cè)芽，但均呈現(xiàn)一個(gè)趨勢(shì)，即NAA 濃度相同時(shí)，6-BA 濃度越高，反而不利于微型月季側(cè)芽的誘導(dǎo)，較高濃度的6-BA 抑制植株生長(zhǎng)，出現(xiàn)腳葉發(fā)黃的現(xiàn)象，當(dāng)6-BA 濃度為2 時(shí)，抑制作用就很明顯了。其中以3 號(hào)培養(yǎng)基：6-BA 1 +NAA 0.1 和4 號(hào)培養(yǎng)基6-BA 1.5 + NAA0.1 的濃度組合增殖效果較好，分別達(dá)100%和102%，且較早誘導(dǎo)出側(cè)芽。

2.3 不同類型培養(yǎng)基對(duì)微型月季生根的影響不論在什么激素濃度下，1/2MS 基本培養(yǎng)基根誘導(dǎo)效果都好于MS，說(shuō)明微型月季生根對(duì)基本培養(yǎng)基無(wú)機(jī)鹽敏感，無(wú)機(jī)鹽濃度是影響微型月季生根的關(guān)鍵因素之一。當(dāng)將基本培養(yǎng)基各成分降至原來(lái)的二分之一時(shí)，對(duì)微型月季生根有較大改善，這一特點(diǎn)在其他木本植物如紅杉上也有發(fā)現(xiàn)[4-5]。同時(shí)在相同基本培養(yǎng)基中，不同激素種類和濃度的使用對(duì)微型月季的生根效果存在一定的差異。本試驗(yàn)中所使用的IBA 和NAA 兩種激素均能誘導(dǎo)微型月季生根，但效果有差異，其根的誘導(dǎo)對(duì)IBA較敏感，并且在0.5 mg/L 的濃度時(shí)效果較好，生根率可達(dá)81 %，18 d 就開始有根突出了，生根植株根的數(shù)量也較均勻，都可達(dá)到6~9 條，27 d 左右就可達(dá)到移栽標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

(1) 本實(shí)驗(yàn)主要是通過(guò)腋芽萌發(fā)來(lái)實(shí)現(xiàn)微型月季的植株再生，接種到初代培養(yǎng)基中，腋芽萌發(fā)的同時(shí)，我們還觀察到大部分外植體在莖段基部長(zhǎng)出白色愈傷組織。由此，在以后的研究中我們還可以嘗試通過(guò)愈傷組織分化途徑來(lái)誘導(dǎo)植株再生，這一途徑在切花月季上已有較多成功的報(bào)道[6-7]，但在微型月季上還未見報(bào)道。由于愈傷組織分化芽比較容易發(fā)生體細(xì)胞無(wú)性系變異，這一方法不僅可以誘導(dǎo)植株再生，還能獲得一定數(shù)量的變異植株，我們可以從中發(fā)現(xiàn)并利用其中的優(yōu)良性狀。

(2) 月季組培苗增殖的主要方式為側(cè)芽增殖，即從葉腋處萌發(fā)出側(cè)芽以達(dá)到增殖的目的。理想的增殖率與激素種類、濃度和葉腋數(shù)有相互關(guān)系。在適宜的激素種類和濃度下，葉腋數(shù)量多的植株發(fā)出來(lái)的側(cè)芽數(shù)就多，但植株上部的葉腋處是不能萌發(fā)側(cè)芽的。所以在適宜的激素種類和濃度下，可以根據(jù)材料情況切割，保留一定數(shù)量的葉腋，以達(dá)到理想的增殖率。