芍藥是我國著名的觀賞、藥用植物，經(jīng)過幾千年的人工栽培選育，芍藥優(yōu)良品種的雄蕊、雌蕊大部分瓣化，結(jié)實率低，且由于異花授粉，種子也無法保持母本的優(yōu)良性狀。芍藥繁殖主要以分株為主，繁殖系數(shù)低，給芍藥產(chǎn)業(yè)化發(fā)展帶來困難。芍藥的離體培養(yǎng)研究目前做得較少，現(xiàn)將芍藥離體組織培養(yǎng)方法介紹如下：
供試材料中，種子、胚和上胚軸選自單瓣品種‘罌粟子’當年套袋成熟飽滿的種子，莖尖選自重瓣型品種的休眠芽。
種子采集接種時間分別為8月、10月、1月、3月，培養(yǎng)基選用1／2MS固體培養(yǎng)基，遮光處理。種子胚根長至3厘米以上時置于冰箱中4℃冷藏30天，后轉(zhuǎn)至白天25℃、夜晚18℃的地方。葉片展開后進行芽增殖培養(yǎng)，光照每天12小時，光強1500至2000勒克斯。
試驗結(jié)果顯示，用芍藥種子作為外植體應保留種皮。去除種皮的種子接種2周后極易褐變被污染而死亡。少數(shù)種子的胚根伸長0.5厘米，也出現(xiàn)生長停止、逐漸死亡的現(xiàn)象。去除種皮使種子的胚乳與培養(yǎng)基直接接觸，易導致褐變。未去除種皮的種子在40天左右陸續(xù)裂口，長出胚根。
種子在試管中生根后，根生長緩慢，3個月未見上胚軸發(fā)芽展葉，且逐漸褐變死亡。而將發(fā)根后的試管苗置于冰箱中4℃冷藏，胚根生長加快，35天后上胚軸頂芽露出，轉(zhuǎn)至組培室中。7天后子葉中間頂芽開始萌動，葉生長，20天后葉柄伸長展開。一般一粒種子僅展開一兩片葉子，少數(shù)種子形成兩個胚軸，展開三四片真葉。
試驗結(jié)果表明，以8月、10月、1月接種的種子成活率較高，需經(jīng)過40至60天后才開始生根，經(jīng)過低溫處理，打破上胚軸休眠后大都能展葉。
芍藥種子萌發(fā)的實生無菌苗生長緩慢，與自然界中芍藥實生苗一樣，只生長一兩個葉片，無法連續(xù)生長。在所試的5種培養(yǎng)基上，不同時期的種子無菌苗均不能增殖和生長。切取無菌苗的上胚軸轉(zhuǎn)接后，也不能分化出叢芽，主要表現(xiàn)為上胚軸對不同濃度的BA（細胞分裂素）、GA（赤霉素）均不敏感，生長處于停滯狀態(tài)，部分外植體基部產(chǎn)生褐變，部分芽尖、葉逐漸枯死。
胚與上胚軸的培養(yǎng)，接種至1／2MS＋BA＋0.2NAA（萘乙酸）和1／2MS＋0.5BA等培養(yǎng)基，pH值調(diào)至5.8。為防止褐變，每升添加50至100毫克維生素C，0.3％至0.5％活性炭，培養(yǎng)室溫度25℃±1，每天光照10小時，光強2000勒克斯。
去除了胚乳的胚體積很小，僅兩三毫米，接種在培養(yǎng)基上20天后子葉能在試管中展開，胚根稍有伸長，但胚芽始終未見生長，轉(zhuǎn)接至不同培養(yǎng)基結(jié)果相同。原因很可能是種子胚乳中存在一定活性物質(zhì)或胚中存在一定抑制物質(zhì)，只有與胚乳和胚根共同生長，合成的某種促進物質(zhì)或解除抑制物質(zhì)可以協(xié)調(diào)內(nèi)源激素關系，促進胚芽生長。
低溫打破休眠后將上胚軸接種在培養(yǎng)基上。30天之后，葉柄伸長，葉展開，較小，表面皺縮，比接種的種子無菌苗小，易發(fā)生褐變。培養(yǎng)基添加活性炭后，可明顯減少褐變污染。幼苗形成后即出現(xiàn)生長停滯狀態(tài)，轉(zhuǎn)接含不同激素的培養(yǎng)基，變化不大。推測上胚軸生長后處于生理休眠期，休眠解除可能需要一個變溫過程。莖尖培養(yǎng)一部分取地栽苗的休眠芽，剪取帶芽鱗的莖尖進行試驗，另一部分于9月下旬掘起植株，置于4℃濕土中，5周后取芽。除去芽鱗，切取莖尖，用0．1％次氯酸鈉溶液消毒15分鐘，無菌水沖洗3至5次，分別接種到以下3種培養(yǎng)基中：
①1／2MS＋0.5BA＋GA
②1／2MS＋1.5BA＋0.5KT
③1／2MS＋1.0BA＋0.5GA
pH值5.6，蔗糖3％，瓊脂0.8％，50毫克／升維生素C，培養(yǎng)室溫度25℃±1，每天光照14小時，光強2000勒克斯。
不同取樣時間對莖尖培養(yǎng)有影響。露地栽培取材時間在10月至11月，或于9月下旬掘起莖芽，置4℃冷藏處理5至6周，成活率和分化率較高。此時接種，休眠芽萌動，生長迅速，分化的試管苗健壯。取材時間在2月，4℃冷藏8至9周的大部分材料芽鱗已經(jīng)裂開，芽已伸長，消毒困難，污染率高。其他時間因芽的休眠尚未徹底解除，內(nèi)部存在抑制物質(zhì)，生長緩慢，成活率和分化率均較低。因此，莖尖培養(yǎng)的適宜取材時間應為10至11月或4℃冷藏5至6周。
從不同培養(yǎng)基對芽增殖的影響來看，BA和GA組合的培養(yǎng)基芽分化效果優(yōu)于BA與KT組合。1.5BA＋0.5KT培養(yǎng)基中叢生芽、葉片數(shù)量較少，苗生長較高。在添加BA、GA的培養(yǎng)基中，叢生芽、葉片數(shù)量較多，苗壯。繼代培養(yǎng)中，切取誘導芽單芽接種，35至40天后基部形成新芽。但隨著代數(shù)增加，叢生芽和葉的數(shù)量逐漸減少，苗生長變?nèi)酰糠盅考�、葉枯死，出現(xiàn)白化苗。到第四代已基本轉(zhuǎn)為玻璃苗、白化苗，褐變嚴重。芽增殖以1／2MS附加0.5BA和1.0GA為較佳培養(yǎng)基。 （記者 何小弟）