筆者從河南省新鄉(xiāng)市封丘縣留光鄉(xiāng)青堆村樹莓專業(yè)合作社—樹莓種植基地的地栽樹莓品種黑莓‘三冠王(Triplecrown)’和紅莓‘紅莓38號(hào)’的母株上，取生長(zhǎng)健壯的枝條為外植體。這2個(gè)品種適宜在我國(guó)華中、華北、西北等地栽培，其材料引自中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究所。

我們于2008年7月16日，在河南省新鄉(xiāng)市封丘縣留光鄉(xiāng)青堆村樹莓種植基地選生長(zhǎng)健壯的無病蟲害母株，剪取生長(zhǎng)力較強(qiáng)的莖段、莖尖去除大葉，裝入塑料袋帶回室內(nèi)保濕保存。

整個(gè)培養(yǎng)過程中采用MS為基本培養(yǎng)基。在外植體的不同發(fā)育階段分別添加不同種類和濃度的植物激素、蔗糖3. 0％、pH值5. 6～5. 8、瓊脂粉4. 0～4. 5 g/ L固化，分裝后在121℃條件下滅菌20 min，放置備用。其中：(1)誘導(dǎo)腋芽生長(zhǎng)培養(yǎng)基為MS+ 6- BA 1. 0 mg/ L+ IBA 0. 1 mg/ L；(2)繼代增殖培養(yǎng)基為MS+ 6- BA 1. 5 mg/ L+ IBA 0. 03 mg/ L；(3)生根培養(yǎng)基為1/ 2 MS+ IBA 0. 2 mg/ L+ 活性炭0. 2％。

將去除葉片的莖段、莖尖在自來水下沖洗約30 min，除去表面污染物，在超凈工作臺(tái)上用刀片去掉莖段上的刺和絨毛，放入大燒杯中，先用75％酒精浸泡15～20 s，再用0. 1％升汞溶液消毒15 min，較后用無菌水漂洗5次，無菌濾紙吸干水分。將消毒好的外植體放入無菌瓶中接種備用。此階段主要解決滅菌、防止污染問題，可以通過各環(huán)節(jié)嚴(yán)格操作和將母株用殺菌劑處理后再取材等措施提高滅菌效果。

將消毒好的樹莓外植體，首先去除兩端切口與消毒液接觸部分少許，然后將其切割成帶有1個(gè)腋芽的小段，接種于腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+ 6- BA 1. 0 mg/ L+ IBA 0. 1 mg/ L上進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)室溫度(26±2)℃，光照強(qiáng)度1 000～2 000 lx，每天光照12 h。5 d后，腋芽開始萌動(dòng)生長(zhǎng)，經(jīng)過15 d左右的培養(yǎng)，外植體全部萌動(dòng)，并膨大、伸長(zhǎng)，芽苗生長(zhǎng)快的可達(dá)1. 5～2. 0 cm，基部產(chǎn)生少量愈傷組織。20～25 d嫩莖達(dá)4～5 cm時(shí)，切成帶有1～2個(gè)芽的莖段，轉(zhuǎn)接于新鮮的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。10 d后，長(zhǎng)出嫩莖，基部產(chǎn)生少量愈傷組織，并開始出現(xiàn)叢生芽，每一個(gè)外植體2～7個(gè)不等，20 d后，芽苗長(zhǎng)4 cm。

將萌發(fā)長(zhǎng)成苗的腋芽切割下，接種于繼代增殖培養(yǎng)基MS+ 6- BA 1. 5 mg/ L+ IBA 0. 03 mg/ L上，一般30 d 后可長(zhǎng)出叢生芽，繼代周期為35～50 d，增殖倍數(shù)5～7倍。要獲得試管繁殖的高效率，植物激素配比是重要因素。為了確定較佳的較好作者簡(jiǎn)介：郭玉霞（1980－），女，助理研究員；從事果樹與激素配比，我們配置了以MS為基本培養(yǎng)基，另加植物激素的幾種不同激素濃度的培養(yǎng)基。在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，6- BA/ IBA比值越大越有利于芽分化。結(jié)果顯示，試驗(yàn)所采用的誘導(dǎo)培養(yǎng)基芽分化雖然較少，但分化的芽都為有效芽。較終篩選出此培養(yǎng)基為較佳的繼代增殖培養(yǎng)基。此外還發(fā)現(xiàn)，在繼代培養(yǎng)的接種操作時(shí)，切去嫩莖的頂芽后，再轉(zhuǎn)接于新鮮培養(yǎng)基上，對(duì)嫩莖增殖有很大的促進(jìn)作用。樹莓品種不同，在相同激素水平、相同條件下的生長(zhǎng)有很大差異。因此在樹莓用于工廠化組培生長(zhǎng)中，不需要盲目追求過高的分化系數(shù)，而要求較佳成苗數(shù)，因此6- BA濃度不宜超過1. 5 mg/ L。利用樹莓組培技術(shù)繁殖速度快，苗生長(zhǎng)健壯，是樹莓優(yōu)良品種種苗繁殖的主要途徑。

繼代獲得較多的叢生芽后，將長(zhǎng)約4～5 cm的芽苗挑出接種于培養(yǎng)基1/ 2 MS+ IBA 0. 2 mg/ L+ 活性炭0. 02％上，進(jìn)行誘導(dǎo)生根培養(yǎng)。培養(yǎng)條件同前。此期選擇整齊一致的無根苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，這對(duì)以后成批形成規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的商品成株至關(guān)重要。接種5 d左右，黑莓品種‘三冠王’就可以出現(xiàn)3～4條健壯白根，而‘紅莓38’則需10 d左右，芽苗迅速長(zhǎng)高具有4～6片葉，即可移栽。在生根培養(yǎng)基中加入0. 2 g/ L活性炭對(duì)樹莓某些品種嫩莖生根有良好促進(jìn)作用。

在組織培養(yǎng)的過程中，試管苗移栽的成功與否也是一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因?yàn)樵嚬苊缭谠嚬苤袩o論生長(zhǎng)多好，移栽若不成功則導(dǎo)致前功盡棄。在試驗(yàn)中，當(dāng)試管苗具有4～6片葉、5～6條根時(shí)即可移栽。移栽前要對(duì)試管苗進(jìn)行通風(fēng)煉苗，先將生根試管苗拿出培養(yǎng)室，去掉封口膜，使嫩苗逐漸與外界接觸，提高適應(yīng)能力，常溫下煉苗3 d后，接著向瓶中加入少量溫水，以軟化培養(yǎng)基。移栽時(shí)用鑷子輕輕取出試管苗，將根部培養(yǎng)基沖洗干凈，移栽到已消毒的純砂∶草炭= 1∶1的混合基質(zhì)中。在處理基質(zhì)時(shí)，用代森錳鋅1 000倍液噴霧，充分拌勻后用水淋透，在移栽后的10 d內(nèi)要注意適當(dāng)遮陰保濕，然后打開遮陰物，在這之間要及時(shí)噴水以保證基質(zhì)潮濕。試驗(yàn)結(jié)果表明：植株移栽成活率為90. 0％以上。